- 品牌:研玘生物
- 產地:中國
- 型號:50T
- 貨號:YQ-65364K
- 價格: ¥2990/盒
- 發布日期: 2024-04-24
- 更新日期: 2024-12-20
產地 | 中國 |
品牌 | 研玘生物 |
貨號 | YQ-65364K |
用途 | 科研試驗 |
包裝規格 | 50T |
是否進口 | 否 |
英文名稱:Xylophilus ampelinus PCR Kit
中文名稱:葡萄細菌性疫病菌PCR試劑盒
包裝規格:50T/盒
預期用途
細菌性疫病是由黃單孢桿菌(屬細菌)侵染所致。病菌主要在種子內越冬,也可隨病殘體在土壤中越冬。本產品就是根據 PCR 原理開發檢測葡萄細菌性疫病菌的試劑盒,它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。
2. 引物經過精心優化,專一性強,只擴增葡萄細菌性疫病菌,與其他細菌沒有交叉反應。
3. 提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
葡萄細菌性疫病菌PCR試劑盒檢驗原理
本試劑盒采用 PCR 技術,針對葡萄細菌性疫病菌的基因高度保守區域設計特異性引物,用 PCR 技術對葡萄細菌性疫病菌的核酸進行體外擴增檢測,在反應體系中含葡萄細菌性疫病菌核酸模板的情況下,PCR 反應進行特異性擴增,利用瓊脂糖凝膠電泳技術對 PCR 擴增產物進行檢測,依據特異性擴增片段的結果,判斷待檢樣品中是否含有豬細小病毒源性成分,實現檢測結果的定性分析。
試劑組成:
名稱 |
規格 |
葡萄細菌性疫病菌擴增液 |
50μL×1管 |
葡萄細菌性疫病菌反應液 |
950μL×1管 |
葡萄細菌性疫病菌陽性質控品 |
50μL×1管 |
葡萄細菌性疫病菌陰性質控品 |
50μL×1管 |
說明書 |
1份 |
實驗說明
1. 不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
2. 試劑盒內各試劑組份足夠包裝規格所標示的檢測次數。
儲存條件及有效期
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融少于 7 次,有效期 12 個月。
適用儀器
無 DNA/RNA 酶的 1.5mL 離心管,0.2mL PCR 反應管,濾芯吸頭(規格:10μL,200μL,1000μL),離心機,振蕩混合器,各種規格的移液器,瓊脂糖,電泳槽,電泳儀,凝膠成像系統。
樣品要求
1. 根據實際情況可采取食品、糞便、嘔吐物、口腔樣本,唾液、咽喉部鼻孔眼部和肛門拭子及病毒培養物作為檢測樣本。
2. 應避免樣本間交叉污染,樣本采集后應及時檢測,也可保存于-20±5℃待檢,長期保存應置于-70℃以下。
樣品保存和運輸
上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。
使用方法
1. 樣品處理(樣本處理區)
2. 樣本前處理
取懸浮的口腔樣本或糞便樣本 100ul,加入 1.5ml 離心管中,用 DNA 核酸提取試劑盒進行提取即可。
DNA 提取
根據您實驗室的具體情況和樣品類型,選擇適當的提取策略方法。為了使實驗結果穩定、有效、可靠,我們建議使用商品化的試劑盒進行提取,嚴格按照對應試劑盒說明書進行操作,樣本核酸提取過程中應避免污染,提取好的模板樣品如不能立即檢測,建議-15℃以下保存。
推薦采用我們公司研發生產的試劑盒:Hypure 病毒基因組 DNA 提取試劑盒(離心柱法)
試劑配制(試劑準備區)
1. 從-15℃以下冰箱中取出試劑盒平衡到室溫(20~25℃),注意避免強光照射,待完全溶解后振蕩混勻并低速離心 10 s,使用低吸附吸頭分液取樣,避免試劑損失和浪費。
2. 根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體
系配制如下表:
試劑 |
葡萄細菌性疫病菌反應液 |
葡萄細菌性疫病菌擴增液 |
用量(樣本數為N) |
19μL |
1μL |
3. 在適當容積的無菌離心管中加入上述試劑,充分振蕩混勻后 2000 rpm 離心 10 s,按照 20 μL/管分裝量將試劑分裝至八聯 PCR 反應管中。
4. 蓋緊八聯 PCR 反應管蓋, 并注意做好相應標識(請標記在八聯 PCR 反應管蓋兩端突出部位,切勿標記在八聯 PCR 反應管蓋中間)。將 PCR 反應管轉移至樣本準備區,剩余試劑放回-15℃以下冰箱冷凍保存。
加樣(樣本處理區)
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 5μL,加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心,核酸加樣過程中應避免污染。
備注:模板濃度高或存在 PCR 抑制物,需用超純水稀釋模板 DNA,DNA 濃度低于 50ng/ul,可加 5μL 模板,高濃度 DNA 可能抑制 PCR 反應。
PCR 擴增(核酸擴增區)
將待檢測反應管置于 PCR 儀反應槽內, 并記錄放置順序;
推薦循環參數設置:
步驟
循環數
溫度
時間
1
1 cycle
95℃
3min
2
95℃
10sec
58℃
15sec
72℃
20sec
3
1 cycle
72℃
5min
1 cycle
4℃
Hold
結果分析判定
電泳檢測
取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的擴增液在擴增結束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。
電泳結果判斷
PCR 產物陽性對照必須有目的片段大小的條帶出現,陰性對照必須無任何擴增,否則實驗無效。對沒有擴增產物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除PCR 抑制劑的感染。
檢測方法的局限性
* 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;
* 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;
* 陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;
* 不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;
* 試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果。
注意事項
* 所有操作嚴格按照說明書進行;
* 試劑盒內各種組分使用前應自然融化,混勻并短暫離心;
* 反應液應避光保存;
* 反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
* 使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服;
* 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;
* 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
* 試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。
特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,試劑盒嚴格按照說明書操作,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!