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大鼠雷帕霉素靶蛋白C2（mTORC2)ELISA試劑盒
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被該指標抗體的微孔中,依次加入標本,標準品、HRP標i的檢測抗體。經過洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氣化物酶的催化下轉化成藍色并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
大鼠雷帕霉素靶蛋白C2（mTORC2)ELISA試劑盒組成

名稱	96孔配置	48孔配置	備注
微孔酶標板	12孔*8條	12孔*4條	無
標準品	0.3ml*6管	0.3ml*6管	無
樣本稀釋液	6ml	3ml	無
檢測抗體-HRP	10ml	5ml	無
20x洗滌緩沖液	25ml	15ml	按說明書稀釋
底物A	6ml	3ml	無
底物B	6ml	3ml	無
終止液	6ml	3ml	無
封板膜	2張	2張	無
說明書	1份	1份	無
自封袋	1個	1個	無

 大鼠雷帕霉素靶蛋白C2（mTORC2)ELISA試劑盒   試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法
1.手工洗板:甩盡孔內液體,每孔,加滿洗滌液,靜置1min后用盡孔內液體,在吸水紙上拍,如此洗板5次。
2.自動洗板機:每孔注入洗液350uL,漫泡1min,洗板5次。
自備物品
1.酶標儀(450nm)
2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、 20-200uL、 200-1000uL
3.37“C恒溫箱

大鼠雷帕霉素靶蛋白C2（mTORC2)ELISA試劑盒操作步驟
1.從室溫平衡20min后的袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4C。
2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品504L;
3.樣本孔先加待測樣本10uL,再加樣本稀釋液40uL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根化物酶(HRP)標記的檢測抗體1004L,用封板膜封住反應,37“C水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5,棄去液體,吸水紙上拍工每,加滿洗滌液 靜置1min,用去洗滌液,吸水紙上拍如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板.
6.每孔加入底物A、B各50uL,37“C避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50L,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
樣品收集、處理及保存方法
1.血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離
2.血漿EDTA、檸檬酸鹽或肝毒抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3.細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搞碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝凍存于-20C,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
結果判斷
繪制標準典線:在Exge工作表中,以標準品濃度作播少標,對應OD值作縱坐標 繪制出標準品線性回歸典線 按曲線方程計算各樣本濃度值。
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